细胞染色-流式双标-试剂盒免费代做-上海研谨生物科技有限公司

免疫組化ABC法

（一）、儀器設備
   1）18cm不銹鋼高壓鍋或電爐或醫用微波爐；
    2）水浴鍋

（二）、試劑 
    1）PBS緩沖液（pH7.2～7.4）：NaCl 137mmol/L，KCl 2.7mmol/L，Na2HPO4 4.3mmol/L， KH2PO4 1.4mmol/L。
    2）0.01mol/L檸檬酸鹽緩沖液（CB，pH6.0，1000ml）：檸檬酸三鈉 3g，檸檬酸 0.4g。
    3）0.5mol/L EDTA緩沖液（pH8.0）：700ml水中溶解186.1gEDTA·2H2O，用10 mmol/L NaOH調至pH8.0,加水至1000ml。
    4）1mol/L的TBS緩沖液（pH8.0）：在800ml水中溶解121gTris堿，用1N的HCl調至pH8.0,加水至1000ml。
    5）酶消化液： a、0.1%胰蛋白酶液：用0.1%CaCl2(pH7.8) 配制。 b、0.4%胃蛋白酶液：用0.1N的HCl配制。
    6）3%甲醇-H2O2溶液：用30%H2O2和80%甲醇溶液配制。
    7）封裱劑：
    a、甘油和0.5mmol/L碳酸鹽緩沖液（pH9.0～9.5）等量混合；
    b、甘油和TBS(或PBS)配制。 
    8）TBS/PBS pH9.0～9.5，適用于熒光顯微鏡標本；pH7.0～7.4適合于光學顯微鏡標本。

（三）、   
    SABC法
    1)脫蠟、水化。
    2)PBS洗兩次各5分鐘。
    3)用蒸餾水或PBS配置新鮮的3%H2O2，室溫封閉5～10分鐘，蒸餾水洗3次。
    4)抗原修復。
    5)PBS洗5分鐘。
    6)滴加正常山羊血清封閉液，室溫20分鐘。甩去多余液體。
    7)滴加抗小鼠一抗（合適的濃度）,室溫1小時或者4℃過夜或者37℃1小時 

  （4℃過夜后在37℃復溫45分鐘）。
    8)PBS洗三次每次2分鐘。
    9)滴加生物素化二抗,20℃～37℃20分鐘。
    10)PBC洗3次每次2分鐘。
    11)滴加試劑SABC，20℃～37℃20分鐘。
    12)PBS洗4次每次5分鐘。
    13)DAB顯色：DAB顯色試劑盒或者自配顯色劑顯色（鏡下掌握顯色程度）。
    14)蒸餾水洗。蘇木素復染2分鐘、鹽酸酒精分化。
    15)脫水、透明、封片、鏡檢。

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