细胞染色-流式双标-试剂盒免费代做-上海研谨生物科技有限公司

禽病毒性關節炎抗體(AVA-Ab)ELISA試劑盒說明書
本試劑僅供研究使用       目的：本試劑盒用于測定禽血清，血漿及相關液體樣本中禽病毒性關節炎抗體(AVA-Ab)水平。
實驗原理：
  本試劑盒采用雙抗原夾心酶聯免疫法（ELISA）測定標本中禽病毒性關節炎抗體(AVA-Ab)水平。用純化的禽病毒性關節炎抗原包被微孔板，制成固相抗原，可與樣品中禽病毒性關節炎抗體(AVA-Ab)相結合，經洗滌除去未結合的抗體和其他成分后再與HRP標記的禽病毒性關節炎抗原結合，形成抗原-抗體-酶標抗原復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），與CUTOFF值相比較，從而判定標本中禽病毒性關節炎抗體(AVA-Ab)的存在與否。

試劑盒組成：
 
試劑盒組成 48孔配置 96孔配置 保存   
說明書 1份 1份    
封板膜 2片（48） 2片（96）    
密封袋 1個 1個    
酶標包被板 1×48 1×96 2-8℃保存   
陰性對照 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8℃保存   
陽性對照 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8℃保存   
酶標試劑 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存   
樣品稀釋液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存   
顯色劑A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存   
顯色劑B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存   
終止液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存   
濃縮洗滌液 （20ml×20倍）×1瓶 （20ml×30倍）×1瓶 2-8℃保存

樣本處理及要求：
1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現沉淀，應再次離心。
2. 血漿：應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應該再次離心。
3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4. 細胞培養上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
5. 組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
6. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟：
編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）
加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，
溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  
配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液加蒸餾水至600ml后備用
洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
溫育：操作同3。
洗滌：操作同5。
顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘
終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

結果判定：
  試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10
  臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
  陰性判定：樣品OD值< 臨界值（CUT OFF）者為禽病毒性關節炎抗體(AVA-Ab)陰性
  陽性判定：樣品OD值≥ 臨界值（CUT OFF）者為禽病毒性關節炎抗體(AVA-Ab)陽性
注意事項
1．操作嚴格按照說明書進行，本試劑不同批號組分不得混用。
2．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
3．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
5．底物請避光保存。
6．試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準，使用雙波長檢測時，參考波長為630nm
7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為2M的硫酸，使用時必須注意安全。

保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個月
公司有詳細大量關于ELISA試劑盒、ELISA原理ELISA批發和試劑盒說明書，購買ELISA試劑盒還可以享受免費代測服務您只需要把標本寄給我們，一星期左右就可以出實驗數據。*期間還有精美禮品贈送，歡迎進入公司。上海研謹生物公司ELISA價格公道合理，實驗過程免費提供，有質量問題可包退包換。
人內嗎啡肽-2(EM-2)ELISAKit
人α-內嗎啡肽(α-EP)ELISAKit
人抑制素(INH)ELISA Kit
人神經元凋亡抑制蛋白(NAIP)ELISA Kit
人食欲素/阿立新B(OX-B)ELISAKit
人促睡眠肽(DSIP)ELISAKit
人6-羥多巴胺(6-OHDA)ELISAKit
人心納素(ANF)ELISAKit
人神經髓鞘蛋白(p2)ELISAKit
人精氨酸加壓素(AVP)ELISA Kit
人垂體腺苷酸環化酶激活肽(PACAP)ELISAKit
人微管相關蛋白2(MAP-2)ELISAKit
人神經絲蛋白(NF)ELISA Kit
人利鉀尿肽(KP)ELISA Kit
人神經降壓素(NT)ELISAKit
人神經激肽B(NKB)ELISAvKit
人強啡肽(Dyn)ELISAKit
人腦啡肽(ENK)ELISA Kit
人γ肽(Pγ)ELISAKit
人C型鈉尿肽(CNP)ELISAKit
人阿立新A(Orexin A)ELISA Kit
人神經肽Y(NP-Y)ELISAKit
人腦腸肽(BGP/Gehrelin)ELISAKit
人乙酰膽堿(ACH)ELISAKit
人腦鈉素/腦鈉尿肽(BNP)ELISA Kit
人細胞角蛋白20(CK20)ELISAKit
人β內啡肽(β-EP)ELISA Kit
人N端前腦鈉素(NT-proBNP)ELISA Kit
人前心鈉肽(Pro-ANP)ELISA Kit